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使用超净工作台实施子宫摘除术净化KM 小鼠的研究

作者:超净工作台 日期:2014/4/28 16:24:51 信息来源:www.chaojinggongzuotai.com

使用超净工作台实施子宫摘除术净化KM 小鼠的研究

 

( 11 中国科学院武汉植物研究所P武汉植物园,武汉 430079; 21 湖北省预防医学科学院,武汉 430079)

【摘要】目的 建立SPF 级湖北封闭群KM 小鼠生产群。

方法 使用超净工作台实施子宫摘除术净化小鼠的方法,建立了SPF 级湖北封闭群KM 小鼠生产群,并对子一代进行了微生物及寄生虫的检测。

结果 使用上述方法实施手术67 例,成功57 例,得净化仔鼠509 只,育成的460 只小鼠符合SPF 级标准。

结论 使用生物净化的方法可以保存优良实验动物品种。

【关键词】小鼠,KM; 净化子宫切除术

【中图分类号】Q95- 336 =文献标识码> A = 文章编号> 1005- 4847( 2003) 04- 0208- 03

 

KM 小鼠引自印度Haffknie 研究所,属瑞士种。1944 月首次引到中国昆明,然后逐渐引至全国各地。经过半个世纪的饲养繁殖,成为我国使用广泛的实验动物,其用量在我国居首位[ 1] 。由于我国地域辽阔,KM 鼠已经在各地安家落户,形成许多亚群[2] ,国内学者认为KM 小鼠是有别于NIH 等知名的远交群,是具有独特遗传学性状的我国自己独有的远交系小鼠[ 3] 

 

从国内各地报道来看[ 4- 6] ,由于KM 小鼠分布广泛,封闭时间长,在各地逐渐形成了不同的群体,而各群体间的生物学特征有所差异。我院实验动物研究中心的KM 小鼠群,在湖北省实验动物中封闭饲养繁殖长达25 年之久,已形成种群的独立性。由于该鼠群具有繁殖水平高、生产周期短、生长发育快、体型较大、对环境及饲喂适应强等特点,深受湖北地区及周边地区广大用户的喜爱。

 

材料及实验动物

111 实验动物

11111 待净化动物

由湖北省预防医学科学院实验动物中心提供生产的普通级KM 雌雄鼠各150 只,合格证号19-007

11112 代乳动物

处于繁殖期的SPF KM 小鼠。母鼠150 只,由湖北省预防医学科学院实验动物中心提供,合格证号19- 082

112 实验场所

湖北省预防医学科学院实验动物中心SPF 级动物设施内。

113 器材及设备

超净工作台、隔水式水浴锅、灭菌手术纱布、灭菌医用棉花、灭菌手术镊子、灭菌手术剪、止血钳、碘酊、过氧乙酸、灭菌渡槽、温度计。

 

方法

211 待净化KM 小鼠及配种日期的选择

为了尽可能的保留KM 小鼠的基因库,选择非同一母鼠所生的小鼠称待净化小鼠,下同进行净化。待净化KM 小鼠在8~ 9 周龄时,按照` B a= 1B1 的比例,在日,18 日,日分次配种。

212 SPF 级代哺乳小鼠的配种

SPF 级代哺乳小鼠由北京国家实验动物种子中心引进,在湖北省预防医学科学院繁殖个月的SPF 级生产扩大群的种鼠,配种比例同待净化的KM小鼠。配种日期为与待净化的普通级KM小鼠,以下称普通级,同步) 3 20 比普通级晚2)比普通级早213 待净化孕鼠临产前的检查自待净化鼠雌雄同居当天计算,从第17 天始,每日上午8: 00~ 9: 00 检查待净化孕鼠的临产状况,选出临产鼠后,立即手术。判断临产鼠的标准是腹部增大,肚皮松弛无力,耻骨联合缝隙增大,可触摸到单个胎儿且胎儿的骨骼较硬,头部与身体大小基本一致。

214 实验场所的准备

21411 净化外区

在准备手术的净化外区,用消毒液喷洒消毒手术前1 h 开启超净工作台的紫外线灯超净工作台上准备消毒过的固定板、碘酊灭菌棉球、灭菌手术剪、灭菌手术镊子及止血钳。

21412 传递区

在传递窗处,用胶带将开口为20 cm @ 15 cm 的透明塑料布固定在传递窗的外侧门上。用透明塑料布作为屏障,在开口处放置含有2% 过氧乙酸消毒液的小鼠饲养盒,形成一个小型的灭菌过渡槽0。带有过渡槽0的传递窗制作好后,开紫外线灯照射24 h。每次手术前1~ 2 h 开启紫外线灯,在传递窗的灭菌槽渡0内,重新置换37 e 2% 过氧乙酸消毒溶液。

215 SPF 级代哺乳动物的准备

繁殖区选择生产后1~ 3 d SPF 哺乳鼠作为代乳鼠,通过清洁走廊拿到隔离区的传递室。

216 子宫摘除术程序与方法

在经过消毒的隔离外区,将待手术的孕鼠浸泡于过氧乙酸消毒液中10 s 进行手术。第一术者在净化区外的超净工作台内将孕鼠断颈椎处死,仰卧固定,常规消毒腹部,做纵向切口,用止血钳夹住子宫口与阴道交界处,迅速剪断子宫与阴道、子宫与卵巢连接处,将离体子宫置入盛有37 e 2% 过氧乙酸灭菌过渡槽中,并通知在隔离区传递室内的第二术者。第二术者听到通知10 s 后,关闭传递窗紫外线灯,打开窗门,取出消毒后的离体子宫,关上传递窗门,打开紫外线灯。在净化区由第二术者快速用纱布包裹仔鼠轻轻擦干子宫表面的消毒液,用镊子撕开子宫剥离胎儿并用纱布擦干鼻孔附近的羊水,用纱布或镊子轻轻刺激仔鼠的身体或尾部,促使胎儿张口呼吸并发出吱吱0的叫声。确定胎儿呼吸成功后,将此窝仔鼠放入自制的保温水盒内用纱布包裹保温,待仔鼠身体变红后这个过程大约5 min) ,放到已准备好的代哺乳母鼠窝内。

217 代乳方法

代乳母鼠在待净化母鼠前1~ 3 d 内生仔,手术成功后将代乳母鼠己哺乳1~ 3 d 内的母鼠的子鼠暂时弃去,用消毒溶液的棉球轻轻擦拭哺乳母鼠的鼻子。净化后的仔鼠放入代乳母鼠的笼中,并观察确定代乳母鼠有代乳迹象后弃去母鼠的亲仔并做好记录。为保证净化的小鼠有足够的乳汁,每只代哺乳的母鼠限定哺乳10 只净化仔鼠。18~ 21 d 后离乳,离乳后的净化鼠做好记录。

218 实验动物质量检测

按国标GB14922- 94,抽样10 只净化后的小鼠进行寄生虫、病毒、细菌检测。

 

结果

311 净化小鼠质量检测结果

抽样的10 只小鼠,均未发现SPF 级动物应排除的寄生虫、病毒、细菌,所净化的小鼠符合SPF 级动物标准。

312 手术结果

批共实施手术67 例,成功57 例,失败的10 例均为早产得净化小仔509 只,每只代哺乳的母鼠约哺乳10 不足10 只按实数哺乳,超过10 只的只哺乳10 ,共育成460 只。其中第一批配种50对,手术24 例,成功18 例,育成小鼠150 第二批配种50 对,手术例,成功例,育成小鼠57 第三批配种50 对,手术35 例,成功32 例,育成小鼠253 只。

313 留种结果

在同一窝SPF 小鼠中,采取留同一性别的小鼠,留后备种雄鼠130 只、雌鼠172 只。视后备种鼠的雌雄比例和小鼠生长发育情况,在9~ 1O 周龄时按1 ` B1 a比例进行配种,共得群小鼠43 对,群小鼠43 对、群小鼠37 对。

314 繁殖结果

50 窝生产卡片进行统计,净化后的第一代KM 小鼠平均产仔数11176 个,哺乳期19112 d,胎次间隔26155 d,成活率99127%。净化的KM 小鼠120对,生产个月共获子一代小鼠4000 余只。

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